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本品以DiR的碘盐形式提供，适用于荧光检测研究。

DiI,DiO,DiD和DiR作为一类长链的亲脂性二烷基碳菁类染料（Dialkylcarbocyanines）荧光染料家族，用于标记细胞膜以及其他脂溶性生物结构。作为一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。一旦进入细胞后，它们在细胞内质膜中逐步扩散，于最佳浓度条件下可将整个细胞均匀染色。这些染料具很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。

四种染料呈现不同的荧光颜色，DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633nm氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

• 染色液制备
  
  • 储存液制备：
    用DMSO或乙醇配置浓度1～5mM的储存液。例如，取25mg DiR（Mw：1013.39g/mol）溶于4.93mL无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。
    注意：未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。
    
  • 工作液制备：
    用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5μM的工作浓度。
    注意：工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。
• 悬浮细胞染色
  
  • 加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。
    
  • 孵育结束，按1000～1500rpm离心5min。
    
  • 去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
    
  • 再重复c，d步骤两次。
• 贴壁细胞染色
  
  • 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
    
  • 从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。
    
  • 在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
    
  • 37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。
    
  • 吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。
• 显微镜检测
  
  • DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见下表：
    

    货号	荧光探针	最大激发/最大发射波长（Ex/Em）	滤光片编号
    			Omeaga公司	Chroma公司
    KM0009	DiI	549/565nm	XF108,XF32	41002,31002
    KM0010	DiO	484/501nm	XF100,XF2341001,31001	41001,31001
    KM0152	DiD	644/665nm	XF110,XF47	41008,31023
    KM0007	DiR	750/780nm	XF112	41009

    
    
  • 多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
    ① DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
    ② DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
    ③ DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；
• 流式细胞仪检测
  经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。